WWW.LIT.I-DOCX.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - различные публикации
 


«(51) МПК C11B 11/00 (2006.01) C07J 75/00 (2006.01) C07J 9/00 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2015120087/04, ...»

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13)

RU 2 601 311 C1

(51) МПК

C11B 11/00 (2006.01)

C07J 75/00 (2006.01)

C07J 9/00 (2006.01)

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА

ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ

(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ

2015120087/04, 27.05.2015

(21)(22) Заявка: (72) Автор(ы):

Артюков Александр Алексеевич (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента:

Кочергина Татьяна Юрьевна (RU), 27.05.2015 Купера Елена Владимировна (RU), Руцкова Татьяна Анатольевна (RU),

Приоритет(ы):

Задорожный Павел Анатольевич (RU), (22) Дата подачи заявки: 27.05.2015 RU Елькин Юрий Николаевич (RU), (45) Опубликовано: 10.11.2016 Бюл. № 31 Маханьков Вячеслав Валентинович (RU), Козловская Эмма Павловна (RU) (56) Список документов, цитированных в отчете о поиске: RU 2086616 C1, 10.08.1997.

RU 2469732 (73) Патентообладатель(и):

C1, 20.12.2012. JP 0060038325 A, 27.02.1985. RU Федеральное государственное бюджетное 2509775 C1, 20.03.2014 .

учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова

Адрес для переписки:

Дальневосточного отделения Российской 690022, г. Владивосток, пр-кт 100 лет академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) (RU) Владивостоку, 159, ФГБУН Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б .

–  –  –

повторяют трижды, объединенные экстракты центрифугируют, промывают холодным 96% упаривают, затем полученный концентрат этиловым спиртом, высушивают на воздухе; затем разбавляют дистиллированной водой до полученный белый порошок, содержащий содержания этилового спирта 20-30%, далее суммарную фракцию воска и стеринов, наносят полученный раствор фильтруют и пропускают на хроматографическую колонку с силикагелем через колонку с DEAE-целлюлозой, и элюируют воск гексаном, далее элюат уравновешенную 30% раствором этилового упаривают в вакууме и сушат, затем элюируют спирта, посторонние примеси отмывают стерины градиентом гексан ацетон, элюат градиентом этилового спирта (4055%), а упаривают в вакууме и сушат. Изобретение фракцию, содержащую воск и стерины, элюируют обеспечивает расширение спектра биологически RU

–  –  –

ethyl alcohol of 20-30 %, then produced solution is then eluate is evaporated in vacuum and dried, then filtered and passed through column with DEAE sterols are eluted with hexane acetone gradient, cellulose, balanced with 30 % solution of ethyl alcohol, eluate is evaporated in vacuum and dried .

foreign impurities are washed with gradient of ethyl EFFECT: invention provides wider spectrum of alcohol (4055 %), and fraction containing wax and biologically active substances obtained from Patiria sterols, is eluted from sorbent with gradient of ethyl pectinifera starfish .

alcohol (6596 %); then eluate is evaporated, 1 cl, 3 dwg, 1 ex RU

Стр.: 2 RU 2 601 311 C1

Изобретение относится к технологии переработки природных объектов и касается способа получения воска и стеринов из морской звезды Patiria pectinifera .

Воски представляют собой сложные эфиры высших жирных кислот и высших высокомолекулярных спиртов и могут быть минерального, животного, растительного и морского происхождения .





Воски устойчивы к действию света, окислителей, нагреванию. Они применяются для уплотнения мазевых основ, кремов [RU 2277410 С2, 20.01.2006; RU 2290170 С1, 27.12.2006; RU 2480199 С2, 20.01.2013], повышают вязкость жиров и углеводов [RU 2167536 С1, 27.05.2001]. Воски используются в составе пищевых композиций [RU 2100938 С2, 10.01.1998; RU 2302743 С2, 20.07.2007; RU 2476076 С2, 27.02.2013], в составе фармацевтических и лечебно-профилактических средств [RU 2396081 С1, 10.08.2010; RU 2497376 С2, 10.11.2013], в составе сельскохозяйственной композиции в качестве кондиционирующего агента [RU 2291847 С2, 20.01.2007] .

Среди животных восков одним из наиболее значимых является спермацет, который добывали из черепных полостей и тела кашалота и некоторых других видов китов [Wellendorf М. // Nature. 1963. V. 198. Р. 1086-1087]. Спермацет широко используется в парфюмерно-косметической промышленности. Он оказывает противовоспалительное, регенерирующее, ранозаживляющее, защитное действие, входит в состав биологически активных добавок [RU 2102062 С1, 20.01.1998; RU 2238092 С2, 20.10.2004; RU 2161887 С1, 20.01.2001]. В связи с запретом на китобойный промысел природный спермацет в составе кремов и мазей чаще всего заменяют импортными синтетическим цетилпальмитатом или киталаном .

Стерины - гидроароматические нейтральные спирты, являющиеся производным стероидов. Известны зоостерины, фитостерины и микостерины. Значительное количество стеринов содержится в гидробионтах: моллюсках, голотуриях, а также в спермацете кашалотов [Drazen J.C. // Comp. Biochem. and Physiol. 2008. V. 151 В. P 79-87; Кандюк .

Р.П. // Экологические проблемы Черного моря: Сб. научн. ст./ ОЦНТЭИ; Одесса:

ОЦНТЭИ. 1999. с. 330; Morris R.J. // Deep-Sea Research. 1973. V. 20. P 911-916], и в ряде .

растительных объектов [RU 2015150 С1, 30.06.1994; RU 2238291 С1, 20.10.2004]. Стерины используются для приготовления медицинских, косметологических препаратов, БАД к пище [RU 2271820 С1, 20.03.2006; RU 2283318 С1, 10.09.2006; RU 2205015 С2, 27.05.2003;

RU 2188563 С2, 10.09.2002; RU 2303373 С2, 27.07.2007; RU 2426452 С2, 20.08.2011] .

Известен способ получения липидов, стеролов и жирно-кислотных композиций из голотурий и офиур [Drazen J.C. // Comp. Biochem. and Physiol. 2008. V. 151 В. P 79-87] .

.

Сущность способа состоит в следующем. У всех образцов удаляют внутренности, образцы лиофильно высушивают, измельчают, экстрагируют системой метанолхлороформ-вода (2:1:0,8), фазы разделяют добавлением смеси хлороформ-вода. Экстракт концентрируют при температуре 40°C. Фракции разделяют методом двумерной бумажной хроматографии, получают воски, стеролы, свободные жирные кислоты и фосфолипиды. Фракции анализируют спектрофотометрическими методами .

Известен способ получения цетилпальмитата из кораллов Madrepora cervicornis [Lester D. et al. // J. Org. Chem. 1941. V. 6. P 120-122]. Кораллы измельчают, экстрагируют в .

аппарате Сокслета ацетоном в течение 24 часов. Экстракт концентрируют и охлаждают .

Выпавший кристаллический осадок фильтруют, промывают разбавленным ацетоном и высушивают в вакууме, затем перекристаллизовывают из ацетона .

Вышеописанные способы являются лабораторными и для промышленного производства непригодны (используются токсичные и пожароопасные реактивы) .

Полученные продукты применяют в лабораторных структурных исследованиях .

Среди морских гидробионтов перспективным источником биологически активных

Стр.: 3 RU 2 601 311 C1

веществ являются морские звезды. Наличие в их пищевом рационе широкого диапазона различных субстратов обеспечивает возможность накопления в организме этих иглокожих разных по природе биологически активных соединений, не являющихся продуктом их собственного биосинтеза .

Известен способ получения ненасыщенных жирных кислот и стерола (эргоста-7, 22диен-3-ола) из морской звезды Marthasterias glacialis [Pereira D.M. et al. // PLoS ONE. 2014 V. 9. N. 2. P е8834]. Сущность этого способа состоит в следующем. Образцы .

замораживают, лиофильно высушивают и измельчают. Порошок экстрагируют системой ацетон-метанол (7:3) до полного обесцвечивания порошка. Экстракт помещают в делительную воронку с равным количеством смеси эфир-гексан (1:1). Добавляют 5% раствор NaCl в эквивалентном объеме. Смесь разделяют на две фазы. Верхнюю органическую фазу промывают водой и упаривают досуха. Состав фракций определен методом хромато-масс-спектрометрии с использованием газовой хроматографии .

Метод лабораторный, для промышленного производства непригоден .

Способов одновременного получения восков и стеринов из морских звезд в доступной патентной и другой научно-технической литературе не обнаружено .

Одним из наиболее распространенных видов морских звезд залива Петра Великого Японского моря является Patiria pectinifera. Эти хищные иглокожие в массовом количестве скапливаются возле марикультурных огородов. Известно использование этого вида морских звезд для производства каротиноидных препаратов [RU 2469732 С1, 20.12.2012] и коллагена [RU 2509775 С1, 20.03.2014] .

Технический результат, обеспечиваемый изобретением, заключается в расширении спектра биологически активных веществ, получаемых из Patiria pectinifera .

В результате осуществления изобретения получают три продукта .

1. Комплекс воска и стеринов, который может служить основой для разработки новых фармацевтических и лечебно-профилактических средств, а также новых БАД к пище .

2. Воск - основа для уплотнения мазевых основ, кремов, смягчения и улучшения эластичности пищевых композиций .

3. Стерины - биологически активные вещества в составе фармацевтических композиций и БАД к пище, применяемые для профилактики и в комплексной терапии атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний .

Заявляемый способ получения воска и стеринов из морской звезды Patiria pectinifera характеризуется простотой, технологичностью, использованием стандартного оборудования, доступных недорогих реактивов, воспроизводимостью, наличием достаточного количества возобновляемых сырьевых ресурсов .

Способ заключается в следующем .

В качестве сырья используют свежевыловленных или замороженных, или законсервированных морских звезд Patiria pectinifera. Сырье сортируют, отделяют от посторонних примесей и морских гидробионтов других видов, помещают на сетчатый фильтр, промывают морской или пресной технической водой от песка и ила, подсушивают потоком воздуха при температуре 18-24°C. Замороженных морских звезд предварительно размораживают, сортируют, промывают, водой на сетчатом фильтре и подсушивают .

Подготовленное сырье заливают 96% этиловым спиртом при соотношении сырье :

экстрагент 1:(1-1,2), оставляют на экстракцию в течение 18-24 ч. Экстракцию повторяют трижды. Экстракты объединяют, упаривают в вакууме при температуре 60°C .

Полученный концентрат разводят дистиллированной водой до содержания этилового

Стр.: 4 RU 2 601 311 C1

спирта 20-30%. Затем водно-этанольный раствор фильтруют через тканевой фильтр и наносят на ионообменную колонку с DEAE-целлюлозой, уравновешенную 30% этиловым спиртом. Колонку предварительно отмывают от сопутствующих примесей градиентом этанола (4055%). Затем элюируют липидную фракцию градиентом этанола (6596%) .

Полученный раствор (элюат) упаривают в вакууме при температуре 60-70°C до полного удаления растворителя. Остаток растворяют в 96% этиловом спирте, раствор фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют и помещают в холодильник при -18 C на 24 ч для вымораживания из этанольного раствора соединений липидной природы (восков, стеринов). Образовавшийся осадок отделяют центрифугированием при -18 - -20°C, промывают холодным 96% этиловым спиртом и сушат от остатка этанола на воздухе. Получают белый порошок - суммарный препарат восков и стеринов .

Выход продукта составляет 3% от веса исходного сырья .

Полученный белый порошок наносят сухим способом на хроматографическую колонку с силикагелем. Колонку промывают гексаном, а затем градиентом гексан ацетон в соотношении (8:27:3). Фракция, элюируемая гексаном, содержит природный воск. Методом хромато-масс-спектрометрии с использованием газовой хроматографии установлено, что полученный природный воск морской звезды P pectinifera .

преимущественно имеет молекулярный ион с молекулярной массой 518 Да (С35Н66О2), что соответствует гептадеканолу линолевой кислоты .

20 Фракция, элюируемая градиентом гексан ацетон, содержит смесь стеринов. Анализ полученных соединений выполняли методом хромато-масс-спектрометрии с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЖХ). Определен качественный состав фракции стеринов: холеста-2,4-диен; эргоста-7,22-диен-3-ол; ацетат стигмаста-5,22-диен-3-ола; стигмаст-5-ен-3-ол .

25 Хромато-масс-спектрометрию с использованием газовой хроматографии (ГХ/МС) проводили на газовом хроматографе НР-6890 с масс-спектрометрической приставкой НР-5973, капиллярной колонкой HP-5MS 5% Phenyl Methyl Siloxane 30m. Хромато-массспектрометрию с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЖХ/МС) проводили на LS-MS 2010 Shimadzu .

30 На фиг. 1 представлена хромато-масс-спектрометрия суммарного препарата воска и стеринов морской звезды P pectinifera .

.

A. ГХ спектр суммарного препарата воска и стеринов. Пики со временем удерживания 15.29, 18.12, 18.78, 21.93 мин соответствуют стеринам; пик 30.86 мин - воска .

B. МС спектр пика воска со временем удерживания 30.86 мин .

35 На фиг. 2 представлена хромато-масс-спектрометрия с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЖХ спектр фракций стеринов морской звезды P pectinifera) .

.

На фиг. 3 представлены МС спектры фракций стеринов морской звезды Р. pectinifera (пики 1-4 фиг. 2). 1. Холеста-2,4-диен; 2. Эргоста-7,22-диен-3-ол; 3. Ацетат стигмастадиен-3-ола; 4. Стигмаст-5-ен-3-ол .

Изобретение иллюстрируется следующим примером .

ПРИМЕР

Сырье - свежевыловленных морских звезд вида Patiria pectinifera в количестве 1,0 кг очищают от посторонних примесей, помещают на сетчатый фильтр, промывают морской 45 или технической пресной водой от песка и ила и подсушивают, при необходимости, потоком воздуха при температуре 18-24°C .

Подготовленное сырье загружают в эмалированный реактор, или полимерную емкость, или другую, разрешенную для контакта с пищевыми продуктами, и заливают

Стр.: 5 RU 2 601 311 C1

96% этиловым спиртом «под зеркало» (1-1,2 л). Экстракция происходит в течение 20 ч .

Полученный этанольный экстракт сливают в накопительную емкость. Повторяют процесс экстракции трехкратно. Объединенный этанольный экстракт упаривают в вакууме при температуре 60°C. Отгон этилового спирта возвращают на повторное экстрагирование сырья .

Концентрат доводят дистиллированной водой до содержания этилового спирта 25% .

Водно-этанольный раствор фильтруют через тканевой фильтр и наносят на ионообменную колонку с DEAE-целлюлозой, уравновешенную 30% этиловым спиртом .

Колонку последовательно отмывают от сопутствующих примесей ступенчатым градиентом этанола (4055%). Фракцию, содержащую воск и стерины, элюируют с сорбента градиентом этанола (6596%). Полученный элюат упаривают в вакууме при температуре 60-70°C. Концентрированный остаток растворяют в небольшом количестве 96% этилового спирта. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр или центрифугируют и помещают в холодильник при -19°C на 24 ч. Выпавший на холоде осадок, содержащий воск и стерины, отделяют центрифугированием при -19°C, промывают холодным 96% этиловым спиртом (-19°C) и высушивают на воздухе .

Получают белый порошок, содержащий суммарную фракцию воска и стеринов (30 г) .

Для разделения воска и стеринов полученный белый порошок (30 г) наносят сухим способом на хроматографическую колонку с силикагелем. Колонку промывают гексаном, элюат упаривают в вакууме. Получают 17 г природного воска. Затем колонку элюируют градиентом гексан ацетон в соотношении (8:27:3). После упаривания получают смесь стеринов в количестве 10 г .

Формула изобретения Способ получения воска и стеринов из морской звезды Patiria pectinifera, характеризующийся тем, что сырье промывают водой и подвергают экстракции 96% раствором этилового спирта в течение 18-24 ч при соотношении сырье:экстрагент 1:(1процедуру повторяют трижды, объединенные экстракты упаривают, полученный концентрат разбавляют дистиллированной водой до содержания этилового спирта 20далее полученный раствор фильтруют и пропускают через колонку с DEAEцеллюлозой, уравновешенную 30% раствором этилового спирта, посторонние примеси отмывают градиентом этилового спирта (4055%), а фракцию, содержащую воск и стерины, элюируют с сорбента градиентом этилового спирта (6596%); затем элюат упаривают в вакууме при температуре 60-70°C, концентрированный остаток растворяют в 96% этиловом спирте, фильтруют, далее полученный раствор вымораживают при температуре -18 - -20°C в течение 24 ч; затем выпавший осадок центрифугируют при

-18 - -20°C, промывают холодным 96% этиловым спиртом, высушивают на воздухе;

затем полученный белый порошок, содержащий суммарную фракцию воска и стеринов, наносят на хроматографическую колонку с силикагелем и элюируют воск гексаном, далее элюат упаривают в вакууме и сушат, затем элюируют стерины градиентом гексан ацетон (8:27:3), элюат упаривают в вакууме и сушат .

–  –  –






Похожие работы:

«Вагнер и Достоевский: биография в переписке 5 Сосновская Оксана Александровна специалист Web-лаборатории филологического факультета, младший научный сотрудник кафедры русской литературы и журналистики Петрозаводского государственного университета (Петрозаводск, Российская Федерация) sosna2679@yandex.ru ДОСТОЕВСКИЙ И ...»

«теология Священник Игорь Троицкий обоСновАние ДвойСтвенноСти ЧеловеЧеСкой ПрироДы и СубСтАнЦиАльноСти Души в ФилоСоФСких ПроизвеДениях л . м.лоПАтинА Статья посвящена русскому философу Льву Михайловичу Лопатину, председателю Московского психологического общества и редактору журнала "Вопросы философии и психологии" дорево...»

«В.В. Полонский ИРОНИЯ ЧЕХОВА: МЕЖДУ КЛАССИКОЙ И "СЕРЕБРЯНЫМ ВЕКОМ" В статье ставится вопрос о характере соотношения между моделями иронии Чехова и символистов. Показывается, что хотя созданная Чеховым философская картина мира перекликается с пессимистическими рефлексиями модернистов начала XX в., эти модели все же не тождествен...»

«© 1993 г. B.C. СЕМЕНОВ РОССИЯ В СЕТИ КОНФЛИКТНОСТИ: МЕЖДУ ВЗРЫВОМ И СОГЛАСИЕМ СЕМЕНОВ Вадим Сергеевич — доктор философских наук, профессор, руководитель исследовательской группы "Проблемы конфликта и согл...»

«Вестник ПСТГУ Раздьяконов Владислав Станиславович, I: Богословие. Философия канд. ист. наук, РГГУ 2015. Вып. 6 (62). С. 55–69 razdyakonov.vladislav@gmail.com ДУХОВНЫЕ АВТОРИТЕТЫ СЕКУЛЯРНОГО ВЕКА: СПИРИТИЧЕСКИЙ ДНЕВНИК М. П. САБУРОВОЙ В. С. РАЗДЪЯКОНОВ В фокусе внимания статьи — спиритический дневник отечественной спиритуалистки Марии Петр...»

«Пояснительная записка Исходными документами для составления рабочей программы учебного курса являются: федеральный компонент государственного образовательного стандарта; примерные программы, созданные на основе федерального компонента государ...»

«120 Culture and Civilization. 2016, Vol. 6, Is. 5А УДК 811.16 Publishing House ANALITIKA RODIS ( analitikarodis@yandex.ru ) http://publishing-vak.ru/ Диминутивные замены в русском словаре: типы, семантика и роль в развитии языка Фуфаева Ири...»

«Рецензии Perceptions of the second sophistic and its times — Regards sur la seconde sophistique et son poque / T . Schmidt, P. Fleury, ed. Toronto: University of Toronto Press, 2010. 304 p. Данная книга явилась результатом работы группы исследователей в рамках проекта "Взгляды на...»







 
2018 www.lit.i-docx.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.